Флаги по клеточкам: Рисунки по клеточкам флаги

После удаления детергента в растворе сосуществуют протеолипосомы, пустые липосомы и свободные белковые агрегаты. Для их разделения образец вводят в 20-процентный слой прерывистого градиента Никоденца (рис.7.5А). Все слои имеют одинаковое осмотическое давление (~ 300 мОсм), чтобы гарантировать отсутствие набухания или усадки липосом. После ультрацентрифугирования (238 000 × g в течение 18 ч) безбелковые липосомы всплывают до полосы 3% Nycodenz, а протеолипосомы появляются на границе 5–15% (рис. 7.5B и C). Концентрации липидов определяют путем измерения фосфатов с помощью колориметра; белок определяют с помощью анализа BCA (бицинхониновой кислоты) (Pierce), а относительную долю BK в каждом слое определяют с помощью денситометрии вестерн-блоттинга.

Рисунок 7.5. Разделение протеолипосом BK. (A) Флотация градиента плотности протеолипосом; массовый процент Nycodenz указан для каждого слоя. (B) Распределение белка (серые столбцы) и фосфолипидов (черные столбцы) в градиентных слоях после флотации (18 ч при 238 000 × г ). Видно, что пустые липосомы всплывают на слой 3. (C) Окрашенный кумасси гель SDS-PAGE показывает белок, извлеченный из протеолипосом BK, по сравнению с очищенным, солюбилизированным белком BK перед восстановлением.

В градиенте плотности положение липосом зависит от размера липосомы (мелкие липосомы более плотные, чем более крупные), а также от наличия встроенного белка. Четкое разделение пустых липосом и протеолипосом на границе 3% и 5-15%, соответственно, согласуется с эффективным разделением из-за дополнительной плотности от белка. Эффективность восстановления (восстановленный slo/общий slo белок) составляет около 70%, и около 80% липосом являются протеолипосомами (доля липидов в протеолипосомах/общий липид).Слои, содержащие как липосомы, так и белки, собирают, и Nycodenz удаляют методом концентрирования-разбавления с использованием спин-колонки для ультрафильтрации Vivaspin (Sartorius North America Inc.) с порогом отсечения 100 кДа. Раствор концентрировали примерно до 1000× г и разбавляли текущим буфером в течение 3–4 циклов до общего разбавления в 10000 раз.

В методе случайных сферических ограничений (RSC) важно, чтобы липосомы имели сферическую форму.Чтобы сделать их высокосферическими, мы набухаем повторными осмотическими шоками, добавляя воду к суспензии липосом (11%, 14%, 18%, 24% и 33% от исходного объема) с интервалом в 1 час при 4°С. . Мы обнаружили, что когда мы использовали один этап набухания, многие липосомы не были сферическими. Мы предполагаем, что причина в следующем: чтобы превратиться из эллипсоида в сферу, часть молекул липидов во внутреннем листке липосомной мембраны должна переместиться на внешний листок. Скорость спонтанного переворота очень низкая, но при осмотическом шоке временное образование дефекта мембраны позволяет произойти перевороту.Множественные осмотические удары позволяют достичь равновесия двух листков с образованием липосом с высокой сферичностью.

Метка лейкоцитов M2G1G2 с помощью автоматического гематологического анализатора, состоящего из трех частей: намек на инфекцию лихорадки денге в соответствующем клиническом контексте

J Lab Physicians. 2019 апрель-июнь; 11(2): 103–106.

Майтрайи Рой

Отделение патологии, М.М. Институт медицинских наук и исследований, Амбала, Харьяна, Индия

Акшай Бали

¹ Отделение гематологии, Диагностическая лаборатория Майтри, Амбала, Харьяна, Индия

Отделение патологии, М.M. Институт медицинских наук и исследований, Амбала, Харьяна, Индия

¹ Отделение гематологии, диагностическая лаборатория Майтри, Амбала, Харьяна, Индия

Поступила в редакцию 20 октября 2018 г.; Принято 22 марта 2019 г.

Это журнал с открытым доступом, и статьи распространяются в соответствии с условиями Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 Лицензия, которая позволяет другим делать ремиксы, настраивать и использовать произведение в некоммерческих целях, при условии, что указано соответствующее имя и новые творения лицензируются на идентичных условиях.

Реферат

ПРЕДПОСЫЛКИ:

Автоматические гематологические анализаторы часто генерируют множество флагов, которые могут дать важную информацию о лежащей в основе гематологической патологии. Хотя патологоанатомы, как правило, хорошо разбираются в признании важности флагов, указывающих на потенциальные лейкемические бласты, их полезность в намеках на инфекционную этиологию, особенно во время эпидемий, менее известна.Мы проанализировали любые аномальные флаги, генерируемые автоматическим гематологическим анализатором, состоящим из трех частей, в серологически подтвержденных случаях лихорадки денге.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ:

В исследование включено 28 больных с диагнозом серологически подтвержденной лихорадки денге. Образцы вены анализировали на трехкомпонентном гематологическом анализаторе ABX Miros-60. Были отмечены данные полного анализа крови и любые аномальные флажки, которые коррелировали с данными мазка периферической крови у всех пациентов.

РЕЗУЛЬТАТЫ:

Флаг аномальных лейкоцитов (WBC) был отмечен у всех 28 пациентов, в том числе у двух, у которых все остальные гематологические параметры были в пределах нормы.У 26 (93%) пациентов был отмечен флаг лейкоцитов M2G1G2, в то время как образцы оставшихся двух пациентов генерировали флаги лейкоцитов M2G1 и L1M2G1G2 соответственно.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

Аномальный флаг лейкоцитов при сопоставлении с соответствующим клиническим контекстом, особенно во время вспышки лихорадки денге, может помочь в выявлении когорты пациентов, которым потребуется немедленное направление для серологического подтверждения.

Ключевые слова: Денге, флаг лейкоцитов M2G1G2, трехкомпонентный гематологический анализатор .Принцип электрического импеданса, также называемый принципом Коултера, используется почти в каждом гематологическом анализаторе для различения эритроцитов (эритроцитов), лейкоцитов (лейкоцитов) и тромбоцитов. Трехкомпонентные анализаторы также используют тот же принцип Коултера для дифференциации лейкоцитов на гранулоциты, лимфоциты и моноциты на основе размера клеток. Анализаторы с пятью частями работают по принципу светорассеяния проточной цитометрии для определения дифференциала лейкоцитов из пяти частей.[1]

В дополнение к подсчету и индексам клеток крови эти анализаторы часто выдают множество флажков, которые чаще остаются в виде сносок в распечатке и редко обращают внимание патологоанатома.[2] Эти флаги при анализе в сочетании с количеством клеток крови и соответствующим клиническим контекстом могут дать потенциальную подсказку к основной аномалии. В нескольких исследованиях наблюдалась хорошая корреляция между флагами лейкоцитов и лейкемическими бластами в PBF [3, 4, 5, 6, 7, 8]. полезность флагов лейкоцитов для намека на лежащую в основе инфекцию плохо изучена и почти не документирована в литературе.[9,10,11,12]

Мы предприняли это исследование, чтобы проанализировать любые аномальные флаги, генерируемые автоматическим гематологическим анализатором, состоящим из трех частей, в серологически подтвержденных случаях лихорадки денге и коррелировать с другими гематологическими параметрами и результатами PBF у этих пациентов.

Материалы и методы

В исследование включено 28 (16 женщин и 12 мужчин) пациентов в возрасте 15–66 лет, проживающих в пригородных и сельских районах, у которых развились различные симптомы: лихорадка высокой степени, головная боль, мышечная и боль в суставах.У всех была диагностирована серологически подтвержденная лихорадка денге.

Во время первоначальной презентации образцы венозной крови собирали во флаконы K2 с ЭДТА и анализировали на трехкомпонентном гематологическом анализаторе ABX Micros-ES60. Были отмечены результаты полного анализа крови (CBC) (включая гемоглобин, гематокрит, количество эритроцитов, индексы эритроцитов, количество лейкоцитов и количество тромбоцитов) и любые сгенерированные флаги лейкоцитов. У всех пациентов исследовали ПСК, окрашенные по Лейшману.

Результаты

Гематологический анализатор ABX micros-60 сгенерировал аномальный флаг лейкоцитов у всех 28 NS1-антиген-позитивных пациентов с лихорадкой денге.У 26 (93%) пациентов был отмечен флаг лейкоцитов M2G1G2, в то время как образцы оставшихся двух пациентов генерировали флаги лейкоцитов M2G1 и L1M2G1G2 соответственно.

Полные данные анализа крови, полученные с помощью гематологического анализатора ABX Micros-60, состоящего из трех частей: M2G1G2 Флаг лейкоцитов у пациентов с лихорадкой денге с (а) тяжелой тромбоцитопенией, повышенным гематокритом и нормальным числом лейкоцитов; (b) тяжелая тромбоцитопения и пограничное количество лейкоцитов; в) лейкопения и умеренная тромбоцитопения; (г) гематологические показатели в пределах нормы

Тромбоцитопения (число тромбоцитов <150 × 10 ⁹ /л) присутствовала у 23 (82%) пациентов, из которых 8 (28.6%) пациентов имели количество тромбоцитов <50 × 10 ⁹ /л на момент постановки диагноза. Лейкопения (число лейкоцитов <4 × 10 ⁹ /л) выявлена ​​у 10 (35,7%) больных. Дифференциальный подсчет лейкоцитов выявил относительный лимфоцитоз у 18 (64,3%) пациентов. Гематокрит был повышен у 4 (14,3%) больных. При исследовании мазка периферической крови бласт не был обнаружен ни в одном из случаев. Активированные и плазмацитоидные лимфоциты, определяемые как лимфоциты с интенсивно базофильной цитоплазмой, умеренным ядерно-цитоплазматическим соотношением и эксцентричными ядрами, наблюдались в 8 (28.6%) пациентов []. Важные гематологические параметры всех 28 пациентов суммированы в .

Пленка периферической крови, показывающая плазмамитоидный лимфоциты, имеющие интенсивную базофильную цитоплазму, умеренное нуклеоцитоплазматическое соотношение, и эксцентриковые ядра (пятно Лейшман, × 1000)

Таблица 1

Гематологические параметры в 28 серологически подтвержденные дегелистые пациенты

Обсуждение

Патологоанатомы, как правило, хорошо осведомлены о полезности лейкоцитарной лейкоцитарной лейкоцитарной лейкоцитарной недостаточности для быстрого подозрения на острый лейкоз клетки/бласты.Хойер и др. . проанализировали флаги лейкоцитов, сгенерированные гематологическим анализатором Coulter STKS у 110 пациентов с острым лейкозом с циркулирующими бластами. Все образцы с высоким количеством лейкоцитов, а также большинство образцов с нормальным/низким количеством лейкоцитов выявили либо окончательные, либо подозреваемые флаги взрыва. Аулеса и др. . отметили более чем 90% диагностическую эффективность флагов незрелых гранулоцитов и бластов в образцах, содержащих> 6% незрелых гранулоцитов и> 2% бластов, соответственно. Kakkar и Kaur наблюдали, что лейкоцитарный маркер M2 подозревается в бластной болезни, генерируемый трехчастным гематологическим анализатором Advia-60 во всех случаях острого лейкоза, сопровождаемых двумя небластными флагами, а именно G1 и G2.[6] Аналогичное наблюдение флага лейкоцитов M2G1G2 при остром лейкозе было сообщено в исследовании, опубликованном Куналом и Анной.[8]

Однако в бедной ресурсами стране с тропическим климатом, где периодические вспышки малярии и лихорадки денге ежегодно уносят больше жизней, распознавание любых постоянных аномальных параметров и/или флагов по предварительным данным гематологического анализатора, которые могут намекать на эту основную инфекцию, было бы чрезвычайно полезно для запуска ранних конкретных исследований. Юн и др. .наблюдали высокую специфичность трех параметров, генерируемых гематологическим анализатором LH 780, состоящим из 5 частей, для выявления малярии у здоровых и лихорадящих людей. Эти параметры включали аномальный пик на гистограмме лейкоцитов до 35 мкл, красные точки в зоне, отличной от лейкоцитов, и связанные с тромбоцитами флажки, указывающие на скопления тромбоцитов или гигантские тромбоциты.[9] Шарма и др. . также наблюдались отклонения в диаграммах рассеяния лейкоцитов у больных малярией.[12]

Денге — распространенная арбовирусная инфекция, вспышки и эпидемии которой происходят почти каждый год в Индии с начала сентября по ноябрь.Одним из первоначальных базовых исследований при клинически подозреваемой инфекции денге всегда является общий анализ крови. Однако для подтверждения лихорадки денге требуется серологическое исследование с помощью ИФА в соответствии с директивами правительства, которые не всегда могут быть легко доступны во всех больницах. В соответствующем клиническом сценарии распознавание важной подсказки из данных общего анализа крови может помочь в определении когорты пациентов, которым потребуется немедленное направление для серологического подтверждения. Тромбоцитопения является наиболее частой гематологической аномалией у больных денге, которая может сопровождаться вариабельным сочетанием лейкопении с относительным лимфоцитозом и повышенным гематокритом.Атипичные и плазмацитоидные лимфоциты обычно обнаруживаются при исследовании PBF. [13,14] Oehadian et al . наблюдали, что гематологический анализатор Sysmex XE-5000 на 5 частей чаще генерировал такие флаги, как повышенное количество атипичных лимфоцитов, количество флуоресцентных лимфоцитов и незрелые тромбоциты, у пациентов с лихорадкой денге [15].

Мы наблюдали аномальные маркеры лейкоцитов, генерируемые трехкомпонентным гематологическим анализатором ABX Micros-60, у 28 пациентов с серологически подтвержденной лихорадкой денге, включая двух пациентов, у которых все другие гематологические параметры были в пределах нормы.Данные общего анализа крови у всех, кроме двух пациентов, имели флаг M2G1G2, в то время как образцы оставшихся двух пациентов имели флаги M2G1 и L1M2G1G2 соответственно, что, как обычно считается, намекает на лейкемические бласты. Однако при тщательном исследовании PBFs бласты не были обнаружены, а активированные/плазмацитоидные лимфоциты наблюдались только у 8 (28,6%) пациентов.

Заключение

С развитием технологий гематологические анализаторы нового поколения запрограммированы на выявление широкого спектра гематологических аномалий и практически заменили предварительный ручной скрининг препаратов в центрах с большим объемом исследований.Тем не менее, в общественном медицинском центре/больнице в сельской местности с ограниченными ресурсами во время эпидемии аномальный флаг лейкоцитов, генерируемый базовым трехкомпонентным гематологическим анализатором в соответствующем клиническом контексте, может помочь в раннем распознавании инфекционной этиологии и направлении для подтверждения. серологические исследования. С другой стороны, отсутствие каких-либо аномальных гематологических параметров и флагов может уменьшить панику и чрезмерное тестирование во время эпидемии денге.

Финансовая поддержка и спонсорство

Нет.

Конфликт интересов

Конфликт интересов отсутствует.

Ссылки

флагов для проверки CBC

Флаги WBC:

• Панцитопения
• Дегенеративный сдвиг влево без токсических изменений или при сомнительной идентификации клеток
• Токсическое изменение без сдвига влево
• Сдвиг влево (>1% полос) без токсических изменений у лошади или коровы.
• WBC> 30 000 у крупных животных
• WBC> 50 000 у мелких животных
• Гистиоциты
• Тучные клетки – любые у кошки, >3 у собаки
  • Если вы видите <3 тучных клетки у собаки, добавьте комментарий: Несколько (или одна) тучных клеток видны в перьях.
• Абсолютный лимфоцитоз у животных старше 2 лет
  • Если вы видите увеличение лимфоцитов при дифференциальной диагностике, проверьте количество лейкоцитов, если количество лейкоцитов низкое, лимфоцитоз может быть относительным (т. е. нейтропения и нормальное количество лимфоцитов). Быстрый способ оценить, будет ли увеличение % лимфоцитов также абсолютным лимфоцитозом, — посмотреть на абсолютное количество лимфоцитов Advia — оно будет близко к подсчету в окончательном отчете, если дифференциал Advia подобен вашему ручному дифференциалу.
  • Если имеется абсолютный лимфоцитоз, а возраст животного менее 2 лет, а лимфоциты представляют собой небольшие зрелые формы, нет необходимости отправлять на обследование, так как это, вероятно, реакция на адреналин.
  • Если животному больше 2 лет или обнаружены какие-либо атипичные лимфоциты, отправьте его на проверку.

Бласты или другие атипичные клетки:

• Бласты: круглые клетки с мелким хроматином, с ядрышками или без них.
• Другие лейкоциты с аномальной морфологией, которые могут включать:
  • Аномальные грануляции или включения
  • Большие клетки – например. гигантские нейтрофилы

Примечания:

Примечания относительно реактивных лимфоцитов/зернистых лимфоцитов:

• Типичные реактивные лимфоциты часто бывают промежуточными или крупными, с глыбчатым хроматином и темно-синей цитоплазмой.
• Реактивные лимфоциты в мазке обычно выглядят гетерогенными – т.е.е. различные размеры, формы ядер и т. д.
• Лимфоциты небольшого размера со зрелым хроматином, но с повышенным количеством светло-голубой цитоплазмы обычно не считаются реактивными или аномальными, если нет лимфоцитоза или если они преобладают над лимфоцитами.
• У здоровых животных может быть до 10% гранулярных лимфоцитов, однако лимфоциты с очень крупными гранулами или крупные лимфоциты с гранулами следует помечать флажком и проверять общий анализ крови.

Очень низкое количество нейтрофилов – всегда внимательно следите за токсическим изменением и сдвигом влево.

Токсическое изменение только в полосах

• называть токсическим или нет, зависит от тяжести токсического изменения
• не называйте токсичными, если только в нескольких полосах и легких токсических изменениях
• Назовите слаботоксичным, если токсическое изменение от умеренного до тяжелого происходит только в полосах

Флаги РБК:

• Анемия с Hct ≤ 15 или ≤ 20 у лошади и собаки
• Любые ядерные эритроциты у лошади
• Большое количество (> 20) ядерных эритроцитов у других видов при отсутствии регенерации
• Гипохромазия
• Макроциты у анемичных лошадей
• Сфероциты – следует проверить при первом поступлении или при ухудшении состояния.
• Агглютинация – то же, что и выше
• Паразиты, отличные от лейкоцитозона, микрофилярий и простого гемопротея (недоуздок, если он меньше и круглее, следует рассмотреть предметное стекло, так как это может быть плазмодий)
• Овалоциты у собаки
• От умеренного до большого количества сиде-роцитов или очень заметных сиде-роцитов
• Тела Хайнца у любых видов, кроме кошек
• Большие тельца Хайнца у кошки

Тромбоциты:

• Очень низкий уровень тромбоцитов – <50 000, когда количество не соответствует мазку, вы должны увидеть среднее поле 3/1000X, если количество составляет 50 000.
• Каждый раз, когда показатели не совпадают с мазком.

Тест Кумбса:

• Просмотрите мазок крови и выполните КАУК для всех тестов Кумбса. Рассмотрите все положительные Кумбса, если не классический IMHA (например, регенеративная анемия, сфероциты).

КП-ГЕМА-ЧТ-001-В.01

Как легко вставить значки флагов стран в ячейки и диаграммы!

Я видел много примеров, в которых вы хотите работать со значками флажков в Excel. Это может быть, когда вы сравниваете страны, рынки, продажи по регионам и так далее.Вместо того, чтобы просто писать длинные названия стран — или более короткие, но, возможно, не такие интуитивно понятные аббревиатуры — вы можете вставлять значки флагов. В этой статье я опишу способы вставки флагов стран в ячейки и диаграммы Excel.

Резюме

Из-за множества ограничений использование изображений или рисунков обычно является лучшим решением для работы со значками флажков в Excel. Однако, если вы работаете только на системах Mac, вы также можете использовать эмодзи. Для пользователей Windows есть одна альтернатива: новая функция FIELDVALUE.Но он работает только в ячейках (не в диаграммах) и не имеет большого количества параметров форматирования. Вот сводка:

Способ 1: вставка значков флажков в виде изображения/изображения в Excel

Первый метод работает универсально в большинстве версий Excel. И на данный момент он единственный с подробными параметрами форматирования. Но, согласитесь, это боль. Это работает так:

1. Вы откуда-то копируете изображение флага (поищите в интернете бесплатные иконки — я нашел здесь: https://www.flaticon.com/packs/flags-3?word=flag
2. Вставьте его в Excel. Либо ваши ячейки, либо ваша диаграмма.

Вот и все. Звучит просто, правда? Так и есть, пока вы не начнете перетаскивать и перемещать.

Возможно, в этом контексте совет: при выборе изображений Excel предоставляет функции выравнивания и изменения размера, как показано на снимке экрана ниже:

Метод 2: Ярлык — вставка флагов всего двумя щелчками мыши

Этот метод также основан на изображениях флагов.Но это значительно быстрее, чем первый метод выше. Взгляните на это:

Наша надстройка Excel, Professor Excel Tools, содержит более 250 флагов стран — в обычной и в «отказной» форме. Он также имеет флаг для Европы. Либо просто вставьте флаг, как показано выше, либо используйте подробное меню выбора.

Установка выполняется очень быстро: просто загрузите бесплатную пробную версию ниже.

Эта функция включена в нашу надстройку Excel «Professor Excel Tools»

(без регистрации, загрузка начинается сразу)

Способ 3: вставка эмодзи-флажков (только для Mac)

Это один из редких случаев, когда речь идет о Microsoft Office, когда пользователи Mac имеют преимущество.Они могут вставлять любые эмодзи, поддерживаемые системой. И кажется, что Apple использует обычный набор смайликов (Microsoft Windows, похоже, поддерживает только выбор, не знаю почему…).

Это означает, что вы можете вставить флаги стран, нажав «Изменить», а затем «Эмодзи и символы» в строке меню.

Если открыть тот же файл на компьютере с Windows, он будет выглядеть так.

Метод 4: новые типы данных/функция FIELDVALUE в Excel также может вставлять флаги

Похоже, Microsoft работает над функцией FIELDVALUE, которая становится все более мощной. Он извлекает данные из (внешних) источников. Одна из первых функций — данные о стране. Помимо вставки только текстовых или числовых данных, он также может вставлять значки флажков.

Вот как это сделать:

1. Введите названия стран в ячейку (убедитесь, что пишете правильно).
2. Выберите все ячейки с названиями стран и нажмите «География» в разделе «Типы данных».

Excel теперь добавляет маленький символ «География» в ячейки вашей страны. Последний шаг — вставить флаги. Просто нажмите на маленькую иконку «Вставить данные» и выберите «Изображение».

Обратите внимание: эта функция доступна только в более новых версиях Microsoft Excel. Дополнительные сведения о функции FIELDVALUE см. в этой статье.

Результат может выглядеть примерно так:

Вы хотите повысить производительность в Excel ?

Получите ленту профессора Excel!

Добавьте более 120 замечательных функций в Excel!

Скачать

Пожалуйста, не стесняйтесь загружать все приведенные выше примеры в одной книге Excel.Просто нажмите здесь.

Изображение предоставлено круглой иконкой: Иконки, сделанные Roundicons с сайта www.flaticon.com

Как вставлять значки флажков в таблицы